Медицинская энциклопедия
      Главная            Каталог            Справочник            Карта сайта            Контакты
www.medicedia.ru Главная » Справочник » Офтальмология » Импрессионная цитология в диагностике бактериального кератита
 
А   Б   В   Г   Д   Е   Ж   З   И   Й   К   Л   М   Н   О   П   Р   С   Т   У   Ф   Х   Ц   Ч   Ш   Щ   Э   Ю   Я   
КАТАЛОГ МЕДРЕСУРСОВ
Аптеки
Больницы и госпитали
Диспансеры
Наркологическая помощь
Народная медицимна
Поликлиники
Скорая и неотложная помощь
Частные клиники
Вебинар как завершить грудное вскармливание. . Заказать свадебный торт. . автомобильные диски
СВЕЖЕЕ В КАТАЛОГЕ
MedTestPro



Импрессионная цитология в диагностике бактериального кератита
Воспалительные заболевания глаз представляют серьезную медико-социальную проблему для практической офтальмологии . Из них наиболее часто встречаются воспалительные заболевания роговицы. По данным ряда авторов, кератиты бактериальной этиологии составляют от 13 до 47% . В 25% случаев бактериальные кератиты становятся причиной инвалидности по зрению, а в 23,7% заболевание может привести кэнуклеации, что существенно снижает качество жизни пациентов, затрудняет социальную адаптацию лиц трудоспособного возраста .

В повседневной практике для определения степени тяжести бактериального кератита офтальмологи зачастую ограничиваются лишь оценкой клинического состояния глаза пациента. Способы цитологического контроля, такие как мазки-отпечатки по методу М.П. Покровской, М.С. Макарова и соскобы эпителия роговицы, позволяющие оценить состояние эпителия в очаге воспаления, не получили широкого распространения по причине их травматичности . Также выше названные способы получения клеточного материала не позволяют одномоментно оценить состояние воспалительного очага, эпителия перилимбальной зоны и отследить динамику репаративных процессов . Это определило необходимость применения новых методов диагностики патологии глаза и, в частности, роговицы.

В последние годы в офтальмологии с диагностической целью все шире применяют метод импрессионной цитологии. Целлюлозо-ацетатные диски, используемые при выполнении данного метода, имеют мелкопористую структуру, что позволяет эпителиальным клеткам поверхностных слоев роговицы легко фиксироваться к их поверхности. В последующем клеточные образцы могут быть подвергнуты цитологическому и имму-ногистохимическому анализу .Метод импрессионной цитологии является малоинвазивным, безопасным и легко выполнимым. Впервые в офтальмологии его применили Egbert et al. в 1977г. . Они использовали целлюлозо-ацетатные диски для получения клеточных образцов конъюнктивы. Впоследствии данный метод был модифицирован и успешно применен для диагностики синдрома «сухого глаза», дефицита витамина А, синдрома Шегрена, развития конъюнктивальной сквамозной метаплазии, рубцового пемфигоида, лимбальной недостаточности, микробных и вирусных инфекций .

Однако анализ доступной литературы показал отсутствие достоверной информации о применении метода импрессионной цитологии в диагностике бактериального кератита .В связи с изложенным, представляется актуальным применение данного метода исследования в офтальмологической практике для диагностики первичной и вторичной форм бактериальных кератитов.Применить метод импрессионной цитологии для диагностики воспалительных заболеваний роговицы и разработать морфологические критерии оценки стадии и степени тяжести бактериального кератита.Методом импрессионной цитологии обследовано 13 пациентов с бактериальным кератитом. Пациенты были разделены на две группы по этиологическому фактору. Первую группу составили 8 пациентов с первичной формой бактериального кератита и вторую группу - 5 пациентов с вторичной формой. При первичной форме в 50% (4слу-чая) причиной заболевания явилась травма без инородного тела и 50% (4 случая) - травма с инородным телом роговицы.

При вторичной форме бактериальный кератит развился в 3-х случаях на фоне заболеваний глаз (глаукома, дистрофия роговицы), в 2-х случаях - на фоне соматических заболеваний (синдром Шегрена, паралич лицевого нерва вследствие ОНМК).Клеточный материал получали методом, описанным R. Singh et al. (2005) . Для исследования нами использовались целлюлозо-ацетатные диски (Millipore, Sigma, диаметр 13 мм, размер пор 0,44 цт). Диск предварительно разрезали на 4 сектора и для исследования применяли 1 сектор.Под местной анестезией 2% раствором лидокаина укладывали сектор целлюлозо-ацетатного диска верхушкой на центр роговицы, основанием на лимбальную зону, и мягко прижимали на 7-10 сек. Далее диск удаляли и фиксировали 96% этиловым спиртом на предметном стекле. Препараты просветляли в ксилоле и окрашивали гематоксилином и эозином. Световую микроскопию выполняли на микроскопе Leica при увеличении хЮО, х200, х400, хЮОО.

При проведении световой микроскопии оценивали клеточный состав и морфофункционапьное состояние эпителиальных клеток.
Клиническая картина при первичной форме бактериального кератита характеризовалась выраженной гиперемией конъюнктивы век, глазного яблока, перикорнеальной инъекцией, отеком эпителия роговицы, стро-мальным отеком, выраженным в большей степени вокруг воспалительного очага. Язвенный дефект выглядел рыхлым, дно было заполнено некротическими массами, края инфильтрированы, подрыты. В передней камере определялся уровень выпота воспалительного характера (гипопион). У всех больных выявлялся небольшой отек радужки, гиперемия ее сосудов .Микроскопическое исследование цитологических образцов пациентов первой группы, полученных на 1-ые сутки пребывания в стационаре, показало следующее: зона, соответствующая дну язвы, была сформирована большим количеством детрита и незначительным количеством сегментоядер-ных нейтрофилов. Края язвенного дефекта в большей степени формировали сегментоя-дерные и в небольшом количестве палочко-ядерные нейтрофилы.

Роговичный эпителий в перифокальной области характеризовался выраженными дистрофическими, некробио-тическими и некротическими изменениями с явлениями кариорексиса, карио и цитолизиса, что соответствовало тяжелой форме течения бактериального кератита (рис. 2а, б). Кроме того, в данной зоне определялись лишь единичные макрофаги, что, позволяет предположить снижение защитных свойств роговицы, что, в свою очередь, определяло тяжесть заболевания.Клеточный состав паралимбапьной области отличался наличием единичных фиброцитов и фибробластов или в отдельных участках их отсутствием. В эпителиальных клетках выявлялись дистрофические и не-кробиотические изменения разной степени выраженности. Оценка ядерно-цитоплазма-тического отношения в эпителиальных клетках показала уменьшение размеров ядер и увеличение объема цитоплазмы. Надо полагать, эти изменения в эпителии паралимбапьной области роговицы отражали их реакцию на некроз и выраженную воспалительную реакцию в перифокальной зоне .


Импрессионная цитология на 7 сутки исследования выявила нарастание пролифе-ративных изменений в роговице. Зона, соответствующая дну язвенного дефекта, как и на 1 -е сутки наблюдения была представлена тканевым детритом. Однако количество детрита было значительно меньшим, что свидетельствовало об очищении язвы. В отличие от фазы активного воспаления среди нитей детрита и остатков разрушенных клеток встречались фибробласты, фиброциты, а также макрофаги, эпителиоциты. Наличие данных клеток, надо полагать, является следствием активации местных защитных механизмов и развития регенераторных процессов в роговице, направленных на заживление язвы и ее эпителизацию.Клеточный состав по краю язвенного дефекта был сходным, однако преобладали мелкие эпителиальные клетки лимбально-го типа, выявлялось достаточно большое количество макрофагов и фибробластов. В то же время инфильтрация сегментоядер-ными нейтрофилами была менее выражена.Часть эпителиальных клеток находилась в состоянии митоза. Данные изменения клеточного состава и морфофункционального состояния эпителиальных клеток нами были расценены как проявление пролифератив-ной фазы воспалительного процесса, направленной на восстановление нарушенной структуры роговицы.

На 14 сутки исследования в клеточных образцах, особенно по краю язвенного дефекта, преобладали эпителиальные клетки базапь-ноготипа. В паралимбапьной зоне значительно увеличивалось количество фиброцитов и фибробластов (рис.3 а, б). Это свидетельствовало о дальнейшем нарастании репара-тивных процессов роговицы, направленных на восстановление ее целостности.Вторичная форма бактериального кератита в отличие от первичной имела подострое начало, вялотекущее течение и клинически характеризовалась смешанной гиперемией конъюнктивы, умеренным слизисто-гной-ным отделяемым, отеком роговицы. Язвенный дефект не имел четких границ, края были инфильтрированы, дно рыхлое. Поверхность роговицы также выглядела рыхлой за счет множественных участков десквамации эпителия (рис. 4).Цитологическая картина клеточных образцов, полученных импрессионным методом. Импрессионная цитология роговицы на 1-е сутки течения первичной формы  преобладанием в инфильтрате сегментоядерных ней-трофилов, хЮОО, б) явления кариорексиса и цитолизиса в эпителиоцитах пери-фокальной зоны, хЮОО; паралимбальная область: в) эпителиальные клетки с выраженным пикнозом ядер и увеличенным объемом цитоплазмы, хЮОО.

Импрессионная цитология роговицы на 14 сутки течения первичной формы бактериального кератита: а) дно язвенного дефекта, х200; б) паралимбальная область, х200.у пациентов второй группы, характеризовалась полиморфностью проявлений. В зоне, соответствующей язвенному дефекту и пе-рифокапьной инфильтрации, среди детрита и нейтрофилов определялись единичные эпителиальные клетки с гиперхромными ядрами, а также эпителиоциты с выраженными дистрофическими, некробиотическими и некротическими изменениями. В перифокапь-ной зоне язвенного дефекта эпителиальные клетки отличались «изъеденностью» контуров ядер, неравномерным мелкоглыбчатым распределением хроматина, явлениями кариорексиса и -лизиса (рис. 5а), набуханием цитоплазмы. Кроме того, в различных полях зрения цитологических образцов имелись клеточные элементы воспалительного ряда с преобладанием нейтрофилов, а также единичные фибробласты и фиброциты, количество которых несколько увеличивалось по направлению к периферии .

В последующие сроки наблюдения (7 и 14 сутки) в отличие от первичной формы бактериального кератита выраженных изменений клеточных образцов в динамике выявлено не было. Так, количество фибробластов и фиброцитов оставалось прежним или незначительно увеличивалось во всех исследуемых областях. Края инфильтрата формировались небольшим количеством детрита, нейтрофилами и эпителиальными клетками с дистрофическими, некробиотическими и некротическими изменениями и эпителиальными клетками с крупными гиперхромными ядрами. По сравнению с первичным кератитом цитологический материал отличался меньшим количеством сегментоядерных нейтрофилов, что, по-видимому, является морфологическим проявлением подавления местных защитных механизмов в ответ на повреждение. Выявленная нами гиперхромия ядер в клетках отражает, с нашей точки зрения, увеличение синтеза белка в них и является, очевидно, проявлением процессов внутриклеточной регенерации, позволяющим на определенном этапе сохранить плотность эпителиоцитов и их состав на контрольном уровне. В целом, эта реакция может быть расценена как компенсаторная в ответ нагибель значительного числа клеток и направленная на поддержание морфо-функ-циональной целостности роговицы. Эпителиальные клетки паралимбапьной области характеризовались более выраженными по сравнению с первичным кератитом изменениями дистрофического характера .

Таким образом, проведенное нами исследование показало, что метод импрессионной цитологии позволяет малоинвазивно, легко, без дискомфорта для пациента провести оценку морфофункциональных изменений в роговице при первичной и вторичной формах бактериального кератита.Световая микроскопия цитологических образцов, полученных импрессионным методом, с оценкой состояния зоны язвенно воспапительного очага, перифокапьной и паралимбальной областей выявила существенные различия между первичной и вторичной формами бактериального кератита.Анализ клеточных образцов при первичной и вторичной формах бактериального кератита показал, что выраженность деструктивных изменений, а соответственно тяжесть и форма заболевания коррелировали с характером морфологических изменений, на что указывали изменения в количественном и качественном составе клеточного материала.При вторичной форме бактериального кератита, в отличие от первичной, во все сроки наблюдения преобладали деструктивные изменения наряду с более низкими активностью воспалительной реакции и уровнем регенераторных процессов.В сочетании с клинико-лабораторными показателями данные импрессионной цитологии могут быть использованы для определения формы бактериального кератита, степени тяжести, стадии воспалительного процесса, выбора оптимального лечения пациента и оценки прогноза заболевания.
А   Б   В   Г   Д   Е   Ж   З   И   Й   К   Л   М   Н   О   П   Р   С   Т   У   Ф   Х   Ц   Ч   Ш   Щ   Э   Ю   Я   
Medicedia.ru - большой медицинский справочник, каталог медицинских ресурсов.